1、母液的培養：先在開水中加入紅茶、白糖(冰糖)少許，調成稀的紅茶糖水，再略煮滅菌後，即盛入消過毒的玻璃杯中，冷卻至35℃時，再加入一塊如手指頭大的紅茶菌種，用潔淨紗布封住杯口，三、四天後，杯底生出綠色纖毛，液麪長出海蜇皮似的菌膜，再過幾天，茶液變酸，味如楊梅湯，就製成了母液。
2、飲液的培養：在消毒過的大口瓶裏，加進煮開的紅茶糖水，冷卻後，把母液加入，過一個星期左右，即發酵成酸甜茶液，即可飲用。茶液飲完，留下的菌母亦可繼續如上法培養飲液，循環不絕。培養紅茶菌的原料比例是紅茶：糖：水=0.2：5：200。
3、菌種的培養：菌種的培養是在培養母液基礎上進行。母液中生成的菌團有多層，下層較嫩而鮮，宜作菌種。良好的菌母會浮在液麪，呈乳白色半透明膠質菌團，培養液氣味爲酸甜。如果菌團上呈紅綠色即表示已受污染，培養液不能飲用。
