乙酰CoA是膽固醇合成的直接原料，它來自葡萄糖、脂肪酸及某些氨基酸的代謝產物。另外，還需要ATP供能和NADPH供氫。合成1分子膽固醇需消耗18分子乙酰CoA、36分子ATP和16分子NADPH。合成途徑可分爲5個階段：1、乙酰乙酰輔酶A與乙酰輔酶A生成二羥甲基戊酸；2、從二羥甲基戊酸脫羧形成異戊二烯單位；3、6個異戊二烯單位縮合生成鯊烯；4、鯊烯通過成環反應轉變成羊毛脂固醇；5、羊毛脂固醇轉變成膽固醇。
