影響PCR擴增結果的因素

影響PCR擴增結果的因素

1、引物:引物到用戶手頭前都是以乾粉形式存在的,乾粉很容易丟掉,引物溶解後可以測定一下OD,將所有引物的濃度調整到一致,對實驗有一定幫助。

2、高溫聚合酶:高溫聚合酶是非常穩定的,除非有蛋白酶的污染。但是不同公司提供的酶擴增是有差異的,活性定量和標示未必相同。選用表現一貫穩定的酶,而不是最便宜的。

3、緩衝液:緩衝液一般不容易出問題,只是使用前需要徹底融化混勻使用。

4、溫度:變性和退火溫度是主要需要考慮的。

5、模板:PCR 的關鍵之一,模板不是越多越好。

6、dNTP: dNTP是PCR擴增體系中最不穩定的,反覆凍融會使dNTP發生降解。

7、Mg2+:是TAQ活性所必須的,濃度過高過低對反應都有比較大的影響。過低,合成效率會下降,過高,非特異性會加大。