1、包被的濃度:高濃度或低濃度會產生不一樣的結果;2、封閉:封閉的好與不好決定顯色後底色會不會有,或者有多少;3、孵育時間和溫度:不同的孵育時間和溫度出現的結果也會不同;4、顯色時間和溫度:不同的顯色時間和溫度會造成不一樣的結果;5、整個緩衝液體系的配方:有的緩衝液能起到減少底色的作用。