蜘蛛俠和毒液一起出現是在第三部《蜘蛛俠》中，在這部電影中毒液是一個反面人物，他是外太空來的，在一次偶然的機會中他跟着蜘蛛俠回家了，並且使蜘蛛俠成爲了自己的宿主，雖然穿上帶有毒液的戰衣蜘蛛俠變的更厲害了，可是卻也像變了一個人一樣。
原來的蜘蛛俠脾氣性格很好，是個非常溫柔並且有正義感的人，可是在成爲毒液的宿主之後，蜘蛛俠所有的反面情緒都暴露出來了，他的嫉妒易怒都被毒液放大了數百倍。更可怕的是，蜘蛛俠很享受擁有毒液的力量，他甚至不願意再變回原來的樣子。
但是後來蜘蛛俠還是醒悟了，他雖然知道充滿力量的感覺很好，但卻不能接受毒液所帶來的邪惡影響，所以蜘蛛俠戰勝了自己戰勝了毒液。在這部電影中毒液是一個大反派，和前段上映的《毒液》電影中的毒液並不是同一個哦。
