蒙娜麗莎所用畫法是西方世界首創的油畫畫法。從歐洲油畫發展史的角度看，油畫是從蠟畫法、蛋膠畫法上逐漸地發展起來的。這種繪畫的方式叫做“暈塗法”。這幅畫包含40層超薄油彩，而且達芬奇可能把油彩先是塗在了指頭之上。這纔在作品臉部發現又不同層次和成分和顏料排列和分佈，還有一點讓人非常驚奇，這40層油料每一層的厚度僅相當於頭髮的五十分之一。這才使得整幅畫感覺在笑，但是仔細觀看笑容就會消失。
